抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。每个抗体存储的*条件是*的,然而我们还是可能总结抗体存储的一些建议和一般准则。抗体的储存时间取决于抗体固有的性质和储存条件。抗体(尤其是酶)必须存放在适当的温度和pH值范围,为了维持蛋白质的活性,以及防止其聚集,经常保存在一定浓度的甘油,蔗糖,或类似的物质里面。表1 总结了抗体储存的一般准则以及其他的注意事项。
水, 4C | 25-50%的甘油或乙二醇,-20C | 冻结在-20 - 80C或在液氮 | 冻干 | |
典型的保质期 | 1个月 | 1年内 | 多年 | 多年 |
抗体浓度 | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml |
稀释载体蛋白 | BSA | BSA | BSA | 没有 |
消毒或抗菌的要求 | 是 | 常 | 没有 | 没有 |
抗氧化剂 | 2-ME, DTT | 2-ME, DTT | 没有 | 没有 |
荧光共轭 | 避光保存 | 避光保存 | 避光保存 | 避光保存 |
pH值 | 7.2-7.6 | 7.2-7.6 | ||
金属螯合剂 | EDTA | EDTA |
不要用没有霜冻的冰箱储存需要零度以下保存的抗体。一般的家用冰箱是没有霜冻的,而且它们可以通过反复的自动解冻来防止霜冻的形成。
带有标记的抗体应该储存在黑色瓶子里或者用锡箔纸盖住瓶子。
一般来说,抗体存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常我们为了避免反复冻融,可以分装抗体。我还可以加入抗微生物药物(如*或硫柳汞)以避免微生物的生长。
冰晶的形成能够破坏蛋白质的结构,因此导致抗体失效。甘油或乙二醇等防冻剂可以防止水分子之间氢键的形成,加入到溶液中可以降低其的凝点。所以,溶液的凝点取决于抗冻剂的组成和浓度。具体的见表2。
10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | 100 | |
甘油 | -2 | -5 | -10 | -16 | -22 | -34 | -38 | -19 | -2 | 17 |
乙二醇 | -4 | -7 | -15 | -23 | -34 | -48 | -51 | -45 | -29 | -12 |
Note: 乙二醇是有毒性的,使用的时候一定要注意安全。
当储存温度低于抗体溶液真实的凝点的时候,抗体溶液就会凝固。但是,这个时候并不会形成冰晶,而是发生了玻璃化作用,其可以保持抗体结果完整性。
为了增加抗体的稳定性,可以向抗体中加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常为了避免反复冻融,可以分装抗体。
因为普通甘油中含有微生物污染,所以使用无菌的甘油显得尤为重要。
抗体制剂应通过使用0.45微米的过滤器过滤和消毒的,并且其必须进行无菌处理,以防止微生物污染。
抗微生物药物,如终浓度为0.02-0.05%(W/V)的*(NaN3)或终浓度为0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长。
*对于大多数细胞和组织是有毒的。*溶液中抗体不应该被直接用在活细胞中,或在体内的研究。此外,*的干扰与大多数共轭反应。*可以通过凝胶过滤或透析清除。
蛋白酶抑制剂可以防止蛋白质水解。由于腹水和血清制试中都含有蛋白酶,所以储存这类抗体和制剂的时候加入蛋白酶抑制剂尤为重要。。冷藏和/或加入蛋白酶抑制剂可用于防止这种降解。
抗体浓度过低(<1毫克/毫升)更容易发生抗体的失活以及增加物理吸附造成的损失。因此,我们都要尽量的保持抗体(例如,1-5毫克/毫升)在储存期间的浓度。通常的做法是添加“载体”蛋白质,如纯化牛血清白蛋白(BSA)以防止这种降解和损失。
多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。即使没有甘油,只要你*冻融,抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。另一个重要的事情是,该抗体浓度应高于1毫克/毫升,因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。
单克隆抗体可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃保存。多年未见有失活、细菌滋生以及氧化。而冻干法(冷冻干燥,干燥或从冰冻状态)为一些冰冻以后不稳定抗体提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下,冻干的抗体是存放在-20℃。虽然冷冻干燥有许多优点,它需要昂贵的设备和劳动力。
带标记的抗体一般储存在黑色容器中或者用锡箔纸盖住。
碱性磷酸酶和其他酶结合物对于冷冻特别敏感,一般应在4C短期存储。
标记抗体长期保存是在终浓度为50%的甘油或乙二醇中于-20C保存。虽然某些酶结合物可在无保护剂的情况下于-20C储存,但必须分装,以防止反复冻融。
荧光遇光容易分解,荧光标记的试剂(不只是抗体)必须避光保存,其应该存放在4C、避免让其凝固。